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微生物培養(yǎng)操作及注意事項(xiàng)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期：2022-06-13
核心提示：微生物的生長(zhǎng)，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響，如營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。微生物的種類不

微生物的生長(zhǎng)，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響，如營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。微生物的種類不同，培養(yǎng)的方式和條件也不盡相同，其貯存方法也是很有講究的，跟小編一起來看看吧。
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實(shí)驗(yàn)原理



細(xì)菌和其它生物一樣，大多數(shù)屬異養(yǎng)菌，必須從周圍環(huán)境中攝取營(yíng)養(yǎng)，進(jìn)行新陳代謝及生長(zhǎng)繁殖等生命活動(dòng)。人為的提供細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（適宜的培養(yǎng)基）和創(chuàng)造適合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的有利條件如溫度、濕度、氣體等，能使細(xì)菌在體外迅速生長(zhǎng)繁殖。
細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件：
1充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
2適宜的溫度
3合適的酸堿度（pH）
4必要的氣體環(huán)境
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培養(yǎng)基配制



正確配制培養(yǎng)基是微生物培養(yǎng)的基礎(chǔ)步驟之一，實(shí)驗(yàn)室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制，并記錄相關(guān)信息，如：培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級(jí)別、每個(gè)成分物質(zhì)含量、制造商、批號(hào)、pH、培養(yǎng)基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實(shí)施的方式、溫度及時(shí)間）、配置日期、人員等，以便溯源。
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培養(yǎng)基滅菌



常見的滅菌方法有：
1化學(xué)物質(zhì)滅菌：藥物與微生物細(xì)胞中的成分反應(yīng)，使蛋白質(zhì)變性、酶失活；使用范圍：器皿、雙手和實(shí)驗(yàn)室、無菌室的環(huán)境滅菌，不能用于培養(yǎng)基滅菌；常用的有酒精、來蘇爾等。

2輻射滅菌：原理是利用高能量的電磁輻射與菌體核酸的光化學(xué)反應(yīng)造成菌體死亡；常用的有紫外線、X射線和γ射線，用于室內(nèi)空氣及器皿表面滅菌。

3干熱滅菌：原理是利用高溫對(duì)微生物有氧化、蛋白質(zhì)變性和電解質(zhì)濃縮作用而殺滅微生物；常用灼燒和電熱箱加熱，140-180℃ 1-2小時(shí)，適于對(duì)玻璃及金屬用具及沙土管滅菌。

4濕熱滅菌：原理是直接用蒸汽滅菌，蒸汽在冷凝時(shí)能釋放出大量潛熱，蒸汽具有強(qiáng)大的穿透力，破壞菌體蛋白和核酸的化學(xué)鍵，使酶失活，微生物因代謝障礙而死亡，水煮常壓滅菌：100℃，或飽和蒸汽滅菌：一般121℃，30分鐘，適合培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備滅菌。

5過濾除菌：除菌原理是利用微生物不能透過濾膜除菌，方法是使用0.01~0.45 μm孔徑濾膜，用于壓縮空氣、酶溶液及其他不耐熱化合物溶液除菌。
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接種方法



將微生物接到適于他生長(zhǎng)的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種，接種方法有以下幾種：
1劃線接種：
最常用的接種方法，即在固體培養(yǎng)基表面作來回直線形的移動(dòng)，就可達(dá)到接種的作用，常用的接種工具有接種環(huán)、接種針等，在斜面接種和平板接種中常用此法

2三點(diǎn)接種：
在研究霉菌形態(tài)時(shí)常用此法，即把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點(diǎn)，讓它各自獨(dú)立形成菌落后，來觀察、研究它們的形態(tài)

3穿刺接種：
在保藏厭氧菌或研究微生物的動(dòng)力時(shí)常采用此法，做穿刺接種時(shí)，用的接種工具是接種針，用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底做支線穿刺

4澆混接種：
將待接的微生物先放入培養(yǎng)皿中，然后再倒入冷卻至45℃左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達(dá)到稀釋的目的；待平板凝固之后，置合適溫度下培養(yǎng)，就可長(zhǎng)出單個(gè)的微生物菌落

5涂布接種：
與澆混接種略有不同，就是先倒好平板，讓其凝固，然后再將菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作來回左右的涂布，讓菌液均勻分布，就可長(zhǎng)出單個(gè)的微生物的菌落

6液體接種：
從固體培養(yǎng)基中將菌洗下，倒入液體培養(yǎng)基中，或者從液體培養(yǎng)物中，用移液管將菌液接至液體培養(yǎng)基中，或從液體培養(yǎng)物中將菌液移至固體培養(yǎng)基中，都可稱為液體接種

7注射接種：
該法是用注射的方法將待接的微生物轉(zhuǎn)接至活的生物體內(nèi)，如人或其它動(dòng)物中，常見的疫苗預(yù)防接種，就是用注射接種，接入人體，來預(yù)防某些疾病

8活體接種：
活體接種是專門用于培養(yǎng)病毒或其它病原微生物的一種方法，因?yàn)椴《颈仨毥臃N于活的生物體內(nèi)才能生長(zhǎng)繁殖，所用的活體可以是整個(gè)動(dòng)物、某個(gè)離體活組織、發(fā)育的雞胚，接種的方式是注射、拌料喂養(yǎng)等

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微生物保藏



根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度， 使細(xì)胞基本處于休眠狀態(tài)，生長(zhǎng)繁殖受到抑制但又不至于死亡，以減低菌種的變異率；低溫、干燥、缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。
菌種保藏步驟：
1挑選特征典型的純菌菌落
2確定保藏的合適菌體形態(tài)
3選擇最適宜的保藏方法
4定期對(duì)保藏菌種進(jìn)行檢查，觀察是否發(fā)生變化，若有變化，須改變保藏方法；保藏期滿 應(yīng)及時(shí)進(jìn)行移種

菌種保藏方法：
1瓊脂斜面低溫保存法：
將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養(yǎng)基）上，按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)，待充分生長(zhǎng)后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮紙包好，放在4℃左右的冰箱中保藏，每隔2~3個(gè)月移種一次，繼續(xù)進(jìn)行保藏。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年～一年，有的甚至更長(zhǎng)時(shí)間

2液體石蠟保存法：
將菌種接種于斜面或穿刺于0.3~ 0.5 %瓊脂半固體高層培養(yǎng)基中，培養(yǎng)好備用。取液體石蠟裝在試管中，121℃高壓滅菌30min，取出置37℃溫箱或110~ 170 ℃烤箱中1 ~ 2 h或干燥器內(nèi)除去液體石蠟中的水分，將上述液體石蠟加入培養(yǎng)好的菌種試管內(nèi)，液體石蠟液面以高出培養(yǎng)基最上端 1cm為宜，將試管直立，放入4℃冰箱中保藏
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編輯：songjiajie2010

 
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