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微生物培養(yǎng)操作及注意事項(xiàng)
發(fā)布日期:2022-06-13
核心提示:微生物的生長(zhǎng),除了受本身的遺傳特性決定外,還受到許多外界因素的影響,如營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。微生物的種類不
微生物的生長(zhǎng),除了受本身的遺傳特性決定外,還受到許多外界因素的影響,如營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。微生物的種類不同,培養(yǎng)的方式和條件也不盡相同,其貯存方法也是很有講究的,跟小編一起來看看吧。
實(shí)驗(yàn)原理
細(xì)菌和其它生物一樣,大多數(shù)屬異養(yǎng)菌,必須從周圍環(huán)境中攝取營(yíng)養(yǎng),進(jìn)行新陳代謝及生長(zhǎng)繁殖等生命活動(dòng)。人為的提供細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(適宜的培養(yǎng)基)和創(chuàng)造適合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的有利條件如溫度、濕度、氣體等,能使細(xì)菌在體外迅速生長(zhǎng)繁殖。
細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件:
1充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
2適宜的溫度
3合適的酸堿度(pH)
4必要的氣體環(huán)境
培養(yǎng)基配制
正確配制培養(yǎng)基是微生物培養(yǎng)的基礎(chǔ)步驟之一,實(shí)驗(yàn)室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制,并記錄相關(guān)信息,如:培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級(jí)別、每個(gè)成分物質(zhì)含量、制造商、批號(hào)、pH、培養(yǎng)基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實(shí)施的方式、溫度及時(shí)間)、配置日期、人員等,以便溯源。
培養(yǎng)基滅菌
常見的滅菌方法有:
1化學(xué)物質(zhì)滅菌:
藥物與微生物細(xì)胞中的成分反應(yīng),使蛋白質(zhì)變性、酶失活;使用范圍:器皿、雙手和實(shí)驗(yàn)室、無菌室的環(huán)境滅菌,不能用于培養(yǎng)基滅菌;常用的有酒精、來蘇爾等。
2輻射滅菌:
原理是利用高能量的電磁輻射與菌體核酸的光化學(xué)反應(yīng)造成菌體死亡;常用的有紫外線、X射線和γ射線,用于室內(nèi)空氣及器皿表面滅菌。
3干熱滅菌:
原理是利用高溫對(duì)微生物有氧化、蛋白質(zhì)變性和電解質(zhì)濃縮作用而殺滅微生物;常用灼燒和電熱箱加熱,140-180℃ 1-2小時(shí),適于對(duì)玻璃及金屬用具及沙土管滅菌。
4濕熱滅菌:
原理是直接用蒸汽滅菌,蒸汽在冷凝時(shí)能釋放出大量潛熱,蒸汽具有強(qiáng)大的穿透力,破壞菌體蛋白和核酸的化學(xué)鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡,水煮常壓滅菌:100℃,或飽和蒸汽滅菌:一般121℃,30分鐘,適合培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備滅菌。
5過濾除菌:
除菌原理是利用微生物不能透過濾膜除菌,方法是使用0.01~0.45 μm孔徑濾膜,用于壓縮空氣、酶溶液及其他不耐熱化合物溶液除菌。
接種方法
將微生物接到適于他生長(zhǎng)的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種,接種方法有以下幾種:
1劃線接種:
最常用的接種方法,即在固體培養(yǎng)基表面作來回直線形的移動(dòng),就可達(dá)到接種的作用,常用的接種工具有接種環(huán)、接種針等,在斜面接種和平板接種中常用此法
2三點(diǎn)接種:
在研究霉菌形態(tài)時(shí)常用此法,即把少量的微生物接種在平板表面上,成等邊三角形的三點(diǎn),讓它各自獨(dú)立形成菌落后,來觀察、研究它們的形態(tài)
3穿刺接種:
在保藏厭氧菌或研究微生物的動(dòng)力時(shí)常采用此法,做穿刺接種時(shí),用的接種工具是接種針,用接種針蘸取少量的菌種,沿半固體培養(yǎng)基中心向管底做支線穿刺
4澆混接種:
將待接的微生物先放入培養(yǎng)皿中,然后再倒入冷卻至45℃左右的固體培養(yǎng)基,迅速輕輕搖勻,這樣菌液就達(dá)到稀釋的目的;待平板凝固之后,置合適溫度下培養(yǎng),就可長(zhǎng)出單個(gè)的微生物菌落
5涂布接種:
與澆混接種略有不同,就是先倒好平板,讓其凝固,然后再將菌液倒入平板上面,迅速用涂布棒在表面作來回左右的涂布,讓菌液均勻分布,就可長(zhǎng)出單個(gè)的微生物的菌落
6液體接種:
從固體培養(yǎng)基中將菌洗下,倒入液體培養(yǎng)基中,或者從液體培養(yǎng)物中,用移液管將菌液接至液體培養(yǎng)基中,或從液體培養(yǎng)物中將菌液移至固體培養(yǎng)基中,都可稱為液體接種
7注射接種:
該法是用注射的方法將待接的微生物轉(zhuǎn)接至活的生物體內(nèi),如人或其它動(dòng)物中,常見的疫苗預(yù)防接種,就是用注射接種,接入人體,來預(yù)防某些疾病
8活體接種:
活體接種是專門用于培養(yǎng)病毒或其它病原微生物的一種方法,因?yàn)椴《颈仨毥臃N于活的生物體內(nèi)才能生長(zhǎng)繁殖,所用的活體可以是整個(gè)動(dòng)物、某個(gè)離體活組織、發(fā)育的雞胚,接種的方式是注射、拌料喂養(yǎng)等
微生物保藏
根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性,在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度, 使細(xì)胞基本處于休眠狀態(tài),生長(zhǎng)繁殖受到抑制但又不至于死亡,以減低菌種的變異率;低溫、干燥、缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。
菌種保藏步驟:
1挑選特征典型的純菌菌落
2確定保藏的合適菌體形態(tài)
3選擇最適宜的保藏方法
4定期對(duì)保藏菌種進(jìn)行檢查,觀察是否發(fā)生變化,若有變化,須改變保藏方法;保藏期滿 應(yīng)及時(shí)進(jìn)行移種
菌種保藏方法:
1瓊脂斜面低溫保存法:
將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面(某些特殊菌種可用液體培養(yǎng)基)上,按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng),待充分生長(zhǎng)后,把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮紙包好,放在4℃左右的冰箱中保藏,每隔2~3個(gè)月移種一次,繼續(xù)進(jìn)行保藏。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng),一般可保藏半年~一年,有的甚至更長(zhǎng)時(shí)間
2液體石蠟保存法:
將菌種接種于斜面或穿刺于0.3~ 0.5 %瓊脂半固體高層培養(yǎng)基中,培養(yǎng)好備用。取液體石蠟裝在試管中,121℃高壓滅菌30min,取出置37℃溫箱或110~ 170 ℃烤箱中1 ~ 2 h或干燥器內(nèi)除去液體石蠟中的水分,將上述液體石蠟加入培養(yǎng)好的菌種試管內(nèi),液體石蠟液面以高出培養(yǎng)基最上端 1cm為宜,將試管直立,放入4℃冰箱中保藏
編輯:songjiajie2010
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