一. 原理

    液-固色譜法” 是利用各組分在固定相上吸附能力的不同而將它們分離的方法。

    當(dāng)組分隨著流動(dòng)相通過色譜柱中的吸附劑時(shí)，組分分子及流動(dòng)相分子對吸附劑表面的活性中心發(fā)生吸附競爭。組分分子對活性中心的競爭能力的大小決定了它們保留值的大小。被活性中心吸附越強(qiáng)的組分分子越不容易被流動(dòng)相洗脫，k值

就大；反之k值就小。組分之間的k值相差越大，分離越容易。

    吸附劑吸附能力的強(qiáng)弱與吸附劑的比表面積、物理化學(xué)性質(zhì)、組分分子的結(jié)構(gòu)和組成以及流動(dòng)相的性質(zhì)等因素有關(guān)。

二. 固定相

     液-固吸附色譜所使用的固定相，多數(shù)是有吸附活性的吸附劑，常用的有表面多孔型和全多孔微粒型硅膠、氧化鋁、分子篩等。

 1. 表面多孔型：又稱薄殼型，是高效液相色譜使用的第一種填料。表面多孔填料的機(jī)械強(qiáng)度好，易填充均勻、緊密，滲透性好，表面孔隙淺，傳質(zhì)快，柱效高，分離速度快。其主要缺點(diǎn)是由于比表面積小，柱容量低，允許進(jìn)樣量小。

 2. 全多孔微粒型：目前廣泛使用的有球形和無定形兩種，顆粒直徑3～10um，它具有粒度小，比表面積大（100～600m²／g），孔穴淺，柱效高和柱容量大的優(yōu)點(diǎn)。

三. 流動(dòng)相

實(shí)現(xiàn)最佳分離與流動(dòng)相的選擇有關(guān)。溶劑的極性是重要的依據(jù)。溶劑的極性強(qiáng)弱可用溶劑強(qiáng)度參數(shù) e⁰ 來衡量。 e⁰ 越大，表示洗脫劑的極性越強(qiáng)。

吸附色譜流動(dòng)相的選擇原則是極性大的試樣需用極性強(qiáng)的洗脫劑，極性弱的試樣宜用極性較弱的洗脫劑。實(shí)際工作中常用兩種或兩種以上溶劑按不同比例混合作洗脫劑，以提供合適的溶劑強(qiáng)度和 k 值，提高分離的選擇性。在分離復(fù)雜試樣時(shí)，可進(jìn)行梯度洗脫，能提高分離效率，改善峰形，加快分析速度。（高效液相色譜法中，流動(dòng)相選擇雖然有一般的指導(dǎo)原則，但主要靠實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。）