HES的分子量及分子量的分布無疑是各企業(yè)及檢測機構(gòu)評價產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣環(huán)節(jié)中較為重要的指標。而關(guān)于多大分子量范圍的HES用于血漿代用品更為合適；何種檢測手段測定其分子量及分子量的分布更為準確，更為可信，更符合工業(yè)快速檢測要求等問題曾引起廣泛討論與研究。

 

      凝膠滲透色譜法（Gel Permeation Chromatography, GPC），又稱為體積排阻法（Size Exclusion Chromatography, SEC），其基本原理是利用樣品分子中含有的不同顆粒大小的分子依次經(jīng)過，具有多孔徑的凝膠色譜填料顆粒（填料顆粒孔內(nèi)部/填料顆粒之間間隙），致使其不同大小顆粒流經(jīng)的實際路程不同而依次按從大到小的順序洗脫出來。因此，曾廣泛用于高分子分子量及分布的測定。然而，該方法需要標準物事先標定，繪制標準曲線，且該標準曲線的準確性在很大程度上依賴于標準物與未知樣品結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的相似性。因此，該方法誤差較大（約10%），如果用于HES的分子量及分子量分布的測定，將很可能得不到精確可靠的數(shù)據(jù)，其質(zhì)量將得不到強有力的保障。

而光散射法與GPC聯(lián)用技術(shù)的出現(xiàn)，迅速取代了凝膠滲透色譜法在該領(lǐng)域的應用。鑒于該技術(shù)不需要標樣事先繪制標準曲線；測試的結(jié)果的準確性又完全不依賴于未知樣品與標樣結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的相似性，因此，該技術(shù)被認為是高分子物質(zhì)分子量的絕對表征方法。

本文簡述了利用光散射法與GPC聯(lián)用技術(shù)測定HES分子量及其分布，確定了10%大分子部分以及10%小分子部分分子量等參數(shù)。

 

1.   原材料及試劑

超純水：miniQ純水儀制備；醋酸及醋酸鹽：國藥集團；羥乙基淀粉溶液（130/0.4）：5mg/ml；

 

2.  儀器及試驗條件

多角度激光光散射儀（DAWN HELEOS II，Wyatt Technology Inc., Santa Barbara, CA）: 激光波長658nm；光源GaAs。

示差折光檢測器：（Optilab rEX，Wyatt Technology Inc., Santa Barbara, CA）

凝膠柱：Shodex 804

定量環(huán)：50ul

 

3.   測試結(jié)果與分析

3.1 羥乙基淀粉折射率增量的測定

折射率增量，即溶液折射率隨溶質(zhì)濃度的變化量，該值是計算分子量的重要參數(shù)之一。本試驗采用稱重稀釋法，將配制的HES母液稀釋稱成8個濃度梯度；依次進樣至Optilab rEX示差檢測器，測定其折射率增量（dn/dc），結(jié)果為：0.1352±0.0007mL/g，R2 = 0.999797。

 

 

3.2 羥乙基淀粉分子量及分布的測定

如圖2所示，羥乙基淀粉的GPC洗脫圖；該峰值分布較寬，其分散度（Mw/Mn）為2.735，重均分子量（Mw）為1.295×105 kDa；與理論值1.30×105 kDa之間的誤差小于5%。 

 

 

 

 

 

3.3 羥乙基淀粉中10%小分子部分以及10%大分子部分分子量測定

如圖3，羥乙基淀粉分子量的累計分布及微分分布圖。圖中1處顯示的是羥乙基淀粉中10%小分子部份，對應的分子量（Mw）：1.0345×105 kDa；圖中2處顯示的是羥乙基淀粉中10%大分子部份，對應的分子量（Mw）：3.8987×105 kDa。即該樣品中80%的羥乙基淀粉分子量在1.0345×105 ~ 3.8987×105 kDa范圍內(nèi)。

 

 

 

                                

 

4.     結(jié)論

本試驗利用光散射法與GPC聯(lián)用技術(shù)測定HES分子量及其分布，并確定了10%小分子部分以及10%大分子部分分子量等參數(shù)。該方法簡單，快速，準確。操作流程易于程序化，規(guī)范化。適合作為羥乙基淀粉檢測的常規(guī)方法。