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濕熱滅菌是目前應(yīng)用廣泛的滅菌方法之一，在濕熱滅菌工藝的開(kāi)發(fā)及驗(yàn)證過(guò)程中，其生物學(xué)驗(yàn)證——“生物指示劑的選型”常常困擾著大多數(shù)用戶，如何選擇合適的生物指示劑才能做到對(duì)濕熱滅菌工藝形成微生物挑戰(zhàn)？接下來(lái)我們通過(guò)案例分析和大家共同探討常見(jiàn)濕熱滅菌生物指示劑的選型問(wèn)題。
結(jié)構(gòu)類(lèi)型案例
當(dāng)滅菌對(duì)象為如培養(yǎng)基、注射劑等液體時(shí)，建議選擇懸液式濕熱滅菌生物指示劑。
當(dāng)滅菌對(duì)象為織物、敷料等固體材料時(shí)，建議選擇片式或者自含式生物指示劑。
解析
1）懸液式生物指示劑是指將孢子懸液密封在安瓿瓶中的一類(lèi)生物指示劑，可以模擬被滅菌液體內(nèi)部的情況，尤其是大體積液體的滅菌狀態(tài)，若為無(wú)法放置片式或自含式生物指示劑的管道內(nèi)部滅菌，也可以選擇懸液式（直管）生物指示劑。
2）片式或自含式生物指示劑為纖維素載體。一般滅菌因子為高溫的飽和蒸汽的固體樣品，如織物，容器等，建議選擇片式或自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑。
液體樣品滅菌或管道滅菌
固體樣品滅菌
根據(jù)滅菌程序F0值選擇案例
Q1某滅菌程序的滅菌條件為121℃，12min，能否選擇FBio≥12min的生物指示劑？
A: 能否選擇FBio≥12min的生物指示劑，需知曉該滅菌程序的FPhy值，即使是相同的滅菌參數(shù)，不同設(shè)備的FPhy的也可能存在較大差異，如脈動(dòng)真空滅菌器和水浴滅菌器。建議根據(jù)《歐洲藥典》的要求，選擇物理殺滅時(shí)間FPhy將指示劑殺滅到10-1～10-3。
Q2滅菌程序1參數(shù)為：121℃，8min，F(xiàn)Phy值為13min，選擇生物指示劑的D值為1.8min，芽孢數(shù)量為2.0×106cfu/支，可以將指示劑殺滅。滅菌程序2參數(shù)為：121℃，10min，F(xiàn)Phy值=15min，能否使用同一批生物指示劑？
A: 本批生物指示劑的FBio經(jīng)計(jì)算為11.3min，推薦應(yīng)用于FPhy值在13.1~16.7min之間的滅菌程序。滅菌程序FPhy為13min經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)可殺滅該批次生物指示劑；滅菌程序2的參數(shù)為121℃ 10min的殺滅程序符合將指示劑殺滅到10-1～10-3的要求，可以共同使用該批次生物指示劑。
Q3 115℃，30min的滅菌程序，采用FBio值≥8min的指示劑是否合適？
A: 生物指示劑F0值≥8min是指“121℃”下生物指示劑F0值。115℃，30min滅菌條件根據(jù)滅菌率（Z值=10℃）計(jì)算，115℃，30min滅菌條件相當(dāng)于121℃滅菌7.5min，此時(shí)選用FBio值≥8min的生物指示劑，結(jié)果會(huì)有概率呈現(xiàn)陽(yáng)性。該滅菌條件需選擇FBio值更低的生物指示劑，GB 18281.3-2015《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物指示物 第3部分：濕熱滅菌用生物指示物》指出在低于121℃的情況下，可以使用枯草芽孢桿菌（B.subtillis）ATCC 35021(5230)等菌種作為生物指示劑的指示微生物。
生物指示劑選型推薦表
名詞解析
1）FPhy（物理F0值）
FPhy（FPhysical）值是指滅菌程序的物理參數(shù)計(jì)算的物理殺滅時(shí)間，是滅菌率在時(shí)間上的累積，計(jì)算公式如下。
式中：∆t=滅菌器中記錄溫度的時(shí)間間隔
T=滅菌器的實(shí)際溫度
2）FBio（生物F0值）
FBio （FBiologica）值是指滅菌程序的生物殺滅時(shí)間，表示生物指示劑挑戰(zhàn)試驗(yàn)系統(tǒng)中微生物實(shí)際殺滅效果的量度，計(jì)算公式如下。
式中：DT=生物指示劑的D值
lgN0=生物指示劑的芽孢數(shù)量
注:不同批次的生物指示劑其 D 值及芽孢數(shù)量不同，故其對(duì)應(yīng)的FBio值也不同。
3）生物指示劑選擇需知曉的參數(shù)在進(jìn)行滅菌驗(yàn)證時(shí)，恰當(dāng)選用生物指示劑，對(duì)提高驗(yàn)證效率、保證驗(yàn)證效率均有重要意義。
選擇生物指示劑時(shí)，須知曉滅菌方式、滅菌條件與滅菌程序的FPhy值，并根據(jù)上述條件考慮生物指示劑的D值、芽孢數(shù)量等參數(shù)。
