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創(chuàng)傷弧菌的制備及鑒定

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2019-01-16
核心提示:創(chuàng)傷弧菌屬革蘭氏陰性弧菌。在液體培養(yǎng)基中菌體大小為0.7*2-3m,稍彎曲。在固體培養(yǎng)基中呈多樣性。有極端單鞭毛。培養(yǎng)特性:營養(yǎng)要
 創(chuàng)傷弧菌屬革蘭氏陰性弧菌。在液體培養(yǎng)基中菌體大小為0.7*2-3μm,稍彎曲。在固體培養(yǎng)基中呈多樣性。有極端單鞭毛。培養(yǎng)特性:營養(yǎng)要求一般,最適生長溫度為30℃,兼性厭氧。在無NaCl及超過8%NaCl的培養(yǎng)基中不生長,可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生長,在含6%NaCl的蛋白胨水中生長良好。


非冷凍樣品采集后應(yīng)立即置7℃~10℃冰箱保存,盡可能及早檢驗(yàn);冷凍樣品應(yīng)在45 ℃以下不超過15 min或在2℃~5℃不超過18 h解凍;如果樣品需要冷凍貯存,應(yīng)在樣品中加等量緩沖甘油-氯化鈉溶液(液體樣品應(yīng)加雙料),推薦貯存溫度為-70 ℃以下。


甲殼類,則應(yīng)先在自來水中洗刷外殼并甩干表面水分,然后以無菌操作打開外殼,按上述要求取相應(yīng)部分。


以無菌操作取檢樣25 g(mL),加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225 mL,用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8 000 r/min均質(zhì)1 min,或拍擊式均質(zhì)器拍擊2 min,制備成1:10的均勻稀釋液。如無均質(zhì)器,則將樣品放入無菌乳缽中磨碎,然后放在500 mL的滅菌容器內(nèi),加225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水,并充分振蕩。魚類和頭足類動物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部內(nèi)容物,包括貝肉和體液;甲殼類取整個動物,或者動物的中心部分,包括腸和鰓。


嗜鹽性試驗(yàn):挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落,分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水,36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h,觀察液體混濁情況。創(chuàng)傷弧菌在無氯化鈉、8%氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長,在6%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。


氧化酶試驗(yàn):挑選純培養(yǎng)的單個菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn),創(chuàng)傷弧菌為氧化酶陽性。


涂片鏡檢:將可疑菌落涂片,進(jìn)行革蘭氏染色,鏡檢觀察形態(tài)。創(chuàng)傷弧菌為革蘭氏陰性,呈棒狀或弧狀。


挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落,轉(zhuǎn)種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層,36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果。創(chuàng)傷弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑,無氣泡,斜面顏色不變或紅色加深,偶爾斜面變黃。


V-P試驗(yàn):以接種針由3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面挑取少許培養(yǎng)物穿刺3%氯化鈉MR-VP培養(yǎng)基,36℃±1 ℃培養(yǎng)24 h,在加V-P試劑前應(yīng)先觀察動力。沿穿刺線周圍呈擴(kuò)散性生長為動力陽性。

編輯:songjiajie2010

 
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