在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

食品伙伴網服務號
當前位置: 首頁 » 檢驗技術 » 食品采樣技術 » 正文

PCR實驗常見問題、原因分析及其解決方案!

放大字體  縮小字體 發布日期:2019-03-26  來源:實驗之家
核心提示:PCR實驗常見問題、原因分析及其解決方案。
PCR產物的電泳檢測時間,一般為48h以內,有些最好于當日進行檢查,大于48h后帶型不規則甚至消失。
但有時仍會與到這樣那樣的問題,影響檢測結果的判斷,具體歸類為以下常見的4點,描述如下:

問題一:無擴增產物
現象:正對照有條帶,而樣品則無。

原因:
1、模板:含有抑制物,含量低。
2、Buffer對樣品不合適。
3、引物設計不當或者發生降解。
4、反應條件:退火溫度太高,延伸時間太短。

對策:
1、純化模板或者使用試劑盒提取模板DNA或加大模板的用量。
2、更換Buffer或調整濃度。
3、重新設計引物(避免鏈間二聚體和鏈內二級結構)或者換一管新引物。
4、降低退火溫度、延長延伸時間。

問題二:非特異性擴增
現象:條帶與預計的大小不一致或者非特異性擴增帶。

原因:
1、引物特異性差。
2、模板或引物濃度過高。
3、酶量過多。
4、Mg2+濃度偏高。
5、退火溫度偏低。
6、循環次數過多。

對策:
1、重新設計引物或者使用巢式PCR。
2、適當降低模板或引物濃度。
3、適當減少酶量。
4、降低鎂離子濃度。
5、適當提高退火溫度或使用二階段溫度法。
6、減少循環次數。

問題三:拖尾
現象:產物在凝膠上呈Smear狀態。

原因:
1、模板不純。
2、Buffer不合適。
3、退火溫度偏低。
4、酶量過多。
5、dNTP、Mg 2+濃度偏高。
6、循環次數過多。

對策:
1、純化模板。
2、更換Buffer。
3、適當提高退火溫度。
4、適量用酶。
5、適當降低dNTP和鎂離子的濃度。
6、減少循環次數。

問題四:假陽性
現象:空白對照出現目的擴增產物。

原因:
靶序列或擴增產物的交叉污染。

對策:   
1、操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。
2、除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管及加樣槍頭等均應一次性使用。
3、各種試劑最好先進行分裝,然后低溫貯存。
編輯:songjiajie2010

 
分享:
[ 網刊訂閱 ]  [ 檢驗技術搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
 

 
 
推薦圖文
推薦檢驗技術
點擊排行
檢驗技術
 
 
Processed in 0.024 second(s), 13 queries, Memory 0.95 M
主站蜘蛛池模板: 亚洲人成网站色7799在线观看 | 97夜夜操| 久久久久久9 | 成年人电影黄色 | 视频在线免费 | 在线观看免费视频一区 | 亚洲一区二区中文字幕 | 久久国产精品99久久久久久老狼 | 波多野吉衣一区二区三区在线观看 | 亚洲成人激情片 | 噜噜嘿 | 一级毛片成人免费看a | 巨乳色最新网址 | 极品美女啪啪 | 精品国产午夜久久久久九九 | 草草影院www色极品欧美 | 就爱干草视频 | 国产精品资源在线 | 欧美成人精品福利网站 | 午夜视频福利在线观看 | 第四色成人网 | 黄色 在线 | 99久久国产免费中文无字幕 | 国产三级日本三级日产三级66 | 日本黄色网址视频 | 噜噜色噜噜 | 亚洲午夜影视 | 特黄免费| 亚洲一卡二卡在线 | 最新版天堂资源8网 | 亚洲色图综合网站 | 香蕉蕉亚亚洲aav综合 | 色宅男看片午夜大片免费看 | 激情6月丁香婷婷色综合 | 国模无水印一区二区三区 | 色哟永久免费 | 色在线视频免费 | 一级特黄国产高清毛片97看片 | 激情网页 | 国产一区二区三区免费大片天美 | 国产中日韩一区二区三区 |