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細(xì)菌的莢膜染色

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-05-11
核心提示:(一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)細(xì)菌的莢膜染色法:(二)實(shí)驗(yàn)原理:由于莢膜與染料間的親和力弱,不易著色,通常采用負(fù)染色法染莢膜,即

(一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>學(xué)習(xí)細(xì)菌的莢膜染色法:

(二)實(shí)驗(yàn)原理:由于莢膜與染料間的親和力弱,不易著色,通常采用負(fù)染色法染莢膜,即設(shè)法使菌體和背景著色而莢膜不著色,從而使莢膜在菌體周?chē)室煌该魅。由于莢膜的含水量在90%以上,故染色時(shí)一般不加熱固定,以免莢膜皺縮變形。

(三)實(shí)驗(yàn)器材

1.活材料:培養(yǎng)3-5天的膠質(zhì)芽胞桿菌Bacillus mucilaginosus,俗稱(chēng)“鉀細(xì)菌”)。該菌在甘露醇作碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí),莢膜豐厚。

2.染色液和試劑 :Tyler法染色液:見(jiàn)附二、、14、用濾紙過(guò)濾后的繪圖墨水、復(fù)紅染色見(jiàn)附二、、2、黑素見(jiàn)附二、、7、6%葡萄糖水溶液、1%甲基紫水溶液、甲醇、20%CuSO4水溶液、香柏油、二甲苯。

3.器材: 載片、片擱架, 擦鏡紙、顯微鏡等。

(四)實(shí)驗(yàn)方法

推薦以下四種染色法,其中以濕墨水方法較簡(jiǎn)便,并且適用于各種有莢膜的細(xì)菌。如用相差顯微鏡檢查則效果更佳。

1.負(fù)染色法:

1)制片:取潔凈的載片一塊,加蒸餾水一滴,取少量菌體放入水滴中混勻并涂布。

2)干燥:將涂片放在空氣中晾干或用電吹風(fēng)冷風(fēng)吹干。

3)染色:在涂面上加復(fù)紅染色液染色2—3min。

4)水洗:用水洗去復(fù)紅染液。

5)干燥:將染色片放空氣中晾干或用電吹風(fēng)冷風(fēng)吹干。

6)涂黑素:在染色涂面左邊加一小滴黑素,用邊緣光滑的載片輕輕接觸黑素,使黑素沿片邊緣散開(kāi),然后向右一拖,使黑素在染色涂面上成為一薄層,并迅速風(fēng)干。

7)鏡檢:先低鏡,再高倍鏡觀察。

結(jié)果:背影灰色,菌體紅色,莢膜無(wú)色透明。

2.濕墨水法

1)制菌液:加1滴墨水于潔凈的載片上,挑少量菌體與其充分混合均勻。

2)加蓋片 放清潔蓋片于混合液上,然后在蓋片上放一張濾紙,向下輕壓,吸去多余的菌液。

3)鏡檢:先用低鏡、再用高倍鏡觀察。

結(jié)果:背景灰色,菌體較暗,在其周?chē)尸F(xiàn)明亮的透明圈即為莢膜。

3.干墨水法

1)制菌液:加1滴6%葡萄糖液于潔凈片一端,挑少量膠質(zhì)芽胞桿菌與其充分混合,再加1環(huán)墨水,充分混勻。

2)制片:左手執(zhí)片,右手另拿邊緣光滑的載片,將載片的一邊與菌液接觸,使菌液沿片接觸處散開(kāi),然后以30度角,迅速而均勻地將菌液拉向片的一端,使菌液鋪成一薄膜。

3)干燥:空氣中自然干燥。

4)固定:用甲醇浸沒(méi)涂片,固定1 min,立即傾去甲醇。

5)干燥:在酒精燈上方,用文火干燥。

6)染色:用甲基紫染1—2min。

7)水洗:用自來(lái)水輕洗,自然干燥。

8)鏡檢:先用低鏡再高倍鏡觀察。

結(jié)果:背景灰色,菌體紫色,莢膜呈清晰透明圈。

4.Tyler法

1)涂片:按常規(guī)法涂片,可多挑些菌體與水充分混合,并將粘稠的菌液盡量涂開(kāi),但涂布的面積不宜過(guò)大。

2)干燥:在空氣中自然干燥。

3)染色:用Tyler染色液染5—7min。

4)脫色:用20%CuSO4水溶液洗去結(jié)晶紫,脫色要適度(沖洗2遍)。用吸水紙吸干,并立即加1—2滴香柏油于涂片處,以防止CuSO4結(jié)晶的形成。

5)鏡檢:先用低鏡再用高倍鏡觀察。觀察完畢后注意用二甲苯擦去鏡頭上的香柏油。

結(jié)果:背景藍(lán)紫色,菌體紫色,莢膜無(wú)色或淺紫色。

(五)實(shí)驗(yàn)作業(yè):

繪出Bacillus mucilaginosus的形態(tài)圖,并注明各部位的名稱(chēng)

(六)注意事項(xiàng)

1.加蓋片時(shí)不可有氣泡,否則會(huì)影響觀察。

2.應(yīng)用干墨水法時(shí),涂片要放在火焰較高處并用文火干燥,不可使片發(fā)熱。

3.在采用Tyler法染色時(shí),標(biāo)本經(jīng)染色后不可用水洗,必須用20%CuSO4沖洗。

編輯:foodyy

 
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