1．細胞收集：懸浮細胞直接收集10ml的離心管中，而帖壁細胞先用滴管輕輕吹打，調亡細胞一經吹打可能脫壁，收集到10ml的離心管中，沒脫壁的細胞用0.02％的EDTA消化使之脫壁，每樣本細胞數為（1～5）×106，500～1000r/min離心5min棄去培養液。
2．用孵育緩沖液洗1次，500～1000r/min離心5min。
3．用100μl的標記溶液重懸細胞，室溫下避光孵育10～15min。
4．500～1000r/min離心5min沉淀細胞，孵育緩沖液洗1次。
5．加入熒光溶液4℃下孵育20min，避光并不時振動。