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單克隆抗體技術(shù)-飼養(yǎng)層細(xì)胞

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27
在體外的細(xì)胞培養(yǎng)中,單個(gè)的或數(shù)量很少的細(xì)胞不易生存與繁殖,必須加入其它活的細(xì)胞才能使其生長繁殖,加入的細(xì)胞稱之為飼養(yǎng)細(xì)胞(Feeder cell)。在細(xì)胞融合和單克隆的選擇過程中,就是在少量的或單個(gè)細(xì)胞的基礎(chǔ)上使其生長繁殖成群體,因此在這一過程中必須使用飼養(yǎng)細(xì)胞。許多種類的動(dòng)物細(xì)胞都可以做飼養(yǎng)細(xì)胞,如正常的脾細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、腹腔滲出細(xì)胞等,常選用腹腔滲出細(xì)胞,其中主要是巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。應(yīng)用腹腔滲出細(xì)胞的好處是:一方面做飼養(yǎng)細(xì)胞,另一方面巨噬細(xì)胞可以吞噬死亡的細(xì)胞和細(xì)胞碎片,為融合細(xì)胞的生長造成良好的環(huán)境。腹腔細(xì)胞的來源可以是與骨髓瘤細(xì)胞同系鼠。也可以是其他種類的小鼠,如C57鼠,昆明小白鼠等。
1.材料
(1)小鼠(Balb/c或C57小白鼠)若干只。
(2)11.6%蔗糖溶液(經(jīng)10磅30min高壓滅菌)。
2.操作方法
(1)拉頸處死小鼠。
(2)70%酒精浸泡消毒10min。
(3)用手術(shù)剪將小鼠腹部剪開一小口,剝開皮膚,露出腹腔。
(4)用注射器將4ml 11.6%蔗糖溶液注入腹腔,用手指輕揉1min仍用該注射器回抽腹腔液體,加入離心管。
(5)1 000r/min離心10min。
(6)取上清,以HAT選擇培養(yǎng)液將細(xì)胞制成懸液。臺盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞,使每毫升含40萬個(gè)活細(xì)胞。
(7)以1ml吸管將細(xì)胞種入微量培養(yǎng)皿,每孔0.05ml,含2萬個(gè)細(xì)胞,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),即可供細(xì)胞融合和克隆化之用。如果在融合后發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)孔中飼養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量少,則可以在細(xì)胞換液時(shí)再加入一些。
 
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