成份：
下層：蛋白胨 1克 氯化鈉 0．5克
葡萄糖 0．2克 瓊脂 0．3-0．5克
水 100毫升
將上述物質混勻調PH7．6后加1．2%酚紅0．4毫升
上層：蛋白胨 1克 氯化鈉 0．5克
乳糖 1克 硫代硫酸鈉 0．03克
硫酸亞鐵 0．02克 瓊脂 1克
水 100毫升
制法： 1將下層配好，分裝中號試管（1毫升），塞好包扎，15磅高壓滅菌半小時，使凝固后備用。
2制上層時，先將蛋白胨水制好，加入硫酸亞鐵，硫代硫酸鈉，加熱溶解PH8．1，再加入酚紅分瓶，（每瓶300毫升，稱取瓊脂包扎滅菌，趁熱加入乳糖隔水煮沸30分鐘或112℃消毒15分鐘）。
3取已制的下層管，每管用無菌法倒入上層液約1。5毫升，邊斜放置使成斜面，凝固后備用。
標準：無菌試驗合格，接種大腸桿菌下層產酸產氣，上層產酸。