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DNA指紋

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-09-23

  人的衛(wèi)星DNA 或稱隨體DNA 是由一些短的DNA 片段(10bp 左右)多次重復(fù)所構(gòu)成的。重復(fù)片段的組成和拷貝數(shù)在不同的個體及基因組的不同位置上不一樣。提取不同個體的基因組DNA 后,用其切點能識別序列為4 個堿基而又不切割該重復(fù)片段的限制性內(nèi)切酶在重復(fù)片段的兩側(cè)切割基因組DNA ,然后將樣品進行凝膠電泳。不同長度的重復(fù)片段(主要是由于重復(fù)單位的拷貝數(shù)不同所致)就會分開,再與含有這些重復(fù)序列的特異性探針雜交,便形成有個體特異性的放射性自顯影圖,亦稱為DNA 指紋。DNA 指紋的圖譜取決于所用探針的核心序列(即重復(fù)序列中的重復(fù)單位)。目前所用的探針有兩種,即探針33.15 。其核心序列為AGAGGTGGGCAGGTGG,33.6 ,即AGGGCTGGAGG 。這就是說這兩種序列在人體基因組中不同的位置上分別重復(fù)不同的次數(shù),而在不同個體的基因組中,對應(yīng)位置上這兩種核心序列的重復(fù)次數(shù)也不相同。這樣用這兩種探針之一與合適的酶切割的人體基因組DNA 片段雜交,在不同的個體將得到不同的DNA 指紋,而且探針33.5DNA 指紋圖也不相同。DNA 指紋具有細胞穩(wěn)定性和種系穩(wěn)定性,是按孟德爾規(guī)律遺傳的,而且雜合性高。雜合性可以這樣來理解,對于由點突變引起的RFLP ,就某一個多態(tài)性切點來說只有兩種多態(tài)性,即切點有( )或切點無(- )。而對由于高變區(qū)重復(fù)片段長度不同所引起的RFLP 來說,在基因組上某一個位置核心序列的重復(fù)次數(shù)在不同的個體不一樣,比如在個體A為10 個拷貝,個體B為15 個拷貝,而個體C又可能為18 個拷貝等等。因此,在不同個體同一個相應(yīng)位置上核心序列的重復(fù)次數(shù)就是多態(tài)的,而不是雙態(tài)的。即使在基因組上的某一個位置處核心序列的次數(shù)一樣,從而被酶切出的長度相同,但在基因組的其他位置上該核心序列重復(fù)次數(shù)又可能不同。由于DNA 指紋是按孟德爾規(guī)律遺傳的,子代的DNA 指紋圖可以追溯到其父母DNA 指紋圖上,而在不是其父母的DNA 指紋圖上則很難找到與其一樣的小隨體DNA 片段。在父親的5 條可分辨的小隨體DNA 片段中,有4 條處于雜合狀態(tài),即這4DNA 片段有不同的個體長度。因此,因高變區(qū)核心序列重復(fù)次數(shù)不同引起的RLFP 才是真正的多態(tài)性。在不同個體,這種RLFPDNA 指紋可以說不存在相同的。即使使用一種探針產(chǎn)生的DNA 指紋圖無法鑒定這兩個個體,如再用另一種探針便有可能將這兩個個體區(qū)分開。DNA 指紋技術(shù)已被應(yīng)用于親子鑒定和法醫(yī)學(xué)上對罪犯的確認等領(lǐng)域。

 
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