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超高保真DNA聚合酶是一類具有極低錯(cuò)配率和高擴(kuò)增準(zhǔn)確性的酶類。它們通過(guò)具備3’→5’外切酶活性，能夠校正錯(cuò)誤摻入的核苷酸，確保DNA序列的忠實(shí)復(fù)制。其保真度比普通Taq DNA聚合酶高出50倍以上。
這類酶在PCR反應(yīng)中起著核心作用，尤其在高通量測(cè)序等需要高準(zhǔn)確性的實(shí)驗(yàn)中，超高保真DNA聚合酶成為優(yōu)選。
1. 高保真性
- 錯(cuò)配率比Taq酶(~2×10⁻⁴)低100-1000倍。
- 依賴 3'→5'外切酶活性 實(shí)時(shí)校對(duì)，切除錯(cuò)誤摻入的堿基。
2. 高擴(kuò)增效率
- 可擴(kuò)增長(zhǎng)片段(如Q5、PrimeSTAR GXL支持20–30 kb)。
- 耐受復(fù)雜模板(高GC含量、二級(jí)結(jié)構(gòu))。
3. 熱穩(wěn)定性
- 最適溫度通常為72–98°C(如KOD HiFi在100°C下仍穩(wěn)定)。
