3. 細胞培養(yǎng)上清:

含有細胞分泌蛋白和死細胞的細胞培養(yǎng)液。

將細胞培養(yǎng)上清液吸入離心管中并以 1000×g 離心 20 分鐘，除去細胞碎片和雜質，收集上清液備用，樣本保存在-20℃或-80℃，避免反復凍融。

4. 細胞裂解液:

經細胞裂解液裂解后的細胞溶液。

（1）吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用胰蛋白酶消化細胞，然后加入適量的培養(yǎng)基將培養(yǎng)板上的細胞沖洗干凈。 懸浮細胞可以省略該步驟。

（2）將細胞懸浮液收集到離心管中，以 1000×g 離心 10 分鐘，然后吸去培養(yǎng)基，用預冷PBS 洗滌細胞 3 次。

（3）加入適量的預冷 PBS（建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。在 6 孔培養(yǎng)板中，每個孔 需要 150-250μL 的 PBS 來重懸細胞。

（4）使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復凍融，重復凍融過程數(shù)次，直至細胞全裂解。也可 以使用超聲波細胞破碎器超聲處理懸浮液來裂解細胞。

（5）4℃下以 10,000×g 離心 10 分鐘，去除細胞碎片，收集上清液， -20℃或-80℃保存，避免反復凍融。