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PCR擴(kuò)增產(chǎn)物分析

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
1、凝膠電泳分析
PCR產(chǎn)物電泳,EB溴乙錠染色紫外儀下觀察,初步判斷產(chǎn)物的特異性。PCR產(chǎn)物片段的大小應(yīng)與預(yù)計的一致,特別是多重PCR,應(yīng)用多對引物,其產(chǎn)物片斷都應(yīng)符合預(yù)訐的大小,這是起碼條件。瓊脂糖凝膠電泳通常應(yīng)用1~2%的瓊脂糖凝膠,供檢測用;聚丙烯酰胺凝膠電泳時,6~10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好,條帶比較集中,可用于科研及檢測分析。
酶切分析:根據(jù)PCR產(chǎn)物中限制性內(nèi)切酶的位點,用相應(yīng)的酶切、電泳分離后,獲得符合理論的片段,此法既能進(jìn)行產(chǎn)物的鑒定,又能對靶基因分型,還能進(jìn)行變異性研究。
2、分子雜交
3、Southern印跡雜交: 在兩引物之間另合成一條寡核苷酸鏈(內(nèi)部寡核苷酸)標(biāo)記后做探針,與PCR產(chǎn)物雜交。此法既可作特異性鑒定,又可以提高檢測PCR產(chǎn)物的靈敏度,還可知其分子量及條帶形狀,主要用于科研。
4、斑點雜交: 將PCR產(chǎn)物點在硝酸纖維素膜或尼膜薄膜上,再用內(nèi)部寡核苷酸探針雜交,觀察有無著色斑點,主要用于PCR產(chǎn)物特異性鑒定及變異分析。
5、核酸序列分析:是檢測PCR產(chǎn)物特異性的最可靠方法。
 
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