其他制備siRNA的方法都需要設(shè)計(jì)和檢驗(yàn)多個(gè)siRNA序列以便找到一個(gè)最有效的siRNA。而用RNaseIII降解長片斷雙鏈RNA成為siRNAs庫就象制備一份混合有各種siRNAs“混合雞尾酒”， RNase III的完全降解產(chǎn)物（12—15bp）同樣可以誘導(dǎo)專一的基因沉默，效果與化學(xué)合成或者是酶法得到的siRNAs相當(dāng)。該方法是選擇200—1000bp的靶mRNA，用體外轉(zhuǎn)錄的方法制備長片斷雙鏈dsRNA，然后用RNaseIII(或Dicer)酶在體外消化，得到一眾siRNAs“混合雞尾酒”。除掉沒有被消化的dsRNA，siRNA混合物就可以直接轉(zhuǎn)染細(xì)胞。由于siRNA混合物中有許多不同的siRNAs，通常能夠保證目的基因被有效地抑制。

主要優(yōu)點(diǎn)：

1. 可以跳過檢測和篩選有效siRNA序列的步驟，避免化學(xué)合成siRNA的昂貴費(fèi)用，siRNA表達(dá)載體的繁瑣勞動(dòng)，以及為找到一個(gè)有效的siRNA 序列所必經(jīng)的漫長的篩選過程，為研究人員節(jié)省時(shí)間和金錢（通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜），是一種比較簡單粗放、快速、性價(jià)比很高的方法。

2. 可能引發(fā)非特異的基因沉默，特別是同源或者是密切相關(guān)的基因。現(xiàn)在多數(shù)的研究顯示這種情況一般不會(huì)造成影響。最近一篇關(guān)于RNase III制備的siRNAs和相關(guān)的RNA結(jié)合蛋白的文章同樣證實(shí)沒有非特異基因沉默的發(fā)生。在除了哺乳動(dòng)物細(xì)胞以外的其他系統(tǒng)中，可以通過Dicer酶復(fù)合物消化長片斷RNA雙鏈，得到針對同一個(gè)靶基因多個(gè)位點(diǎn)的siRNAs群，從而特異的抑制目的基因的表達(dá)。這些結(jié)果提示存在某種適當(dāng)?shù)臋C(jī)制來維護(hù)抑制反應(yīng)的高度專一性。Ambion公司曾經(jīng)用它的SilencersiRNA Cocktail Kit(RNase III)試劑盒成功關(guān)閉幾個(gè)基因，包括c-fos, GAPDH, La, ß-actin, 和Ku-70。

3. RNase III能夠消化各種來源的雙鏈RNA。

4. RNase III 得到的12-15bpsiRNAs庫能夠非常有效的抑制基因的表達(dá)。在這個(gè)siRNAs庫中既有一些有效的siRNAs分子，也有很多無效的siRNAs部分。

5. 導(dǎo)入這種方法制備的siRNA庫，并沒有表現(xiàn)比用化學(xué)合成法制備特定的siRNAs更高的毒性或者是對基因表達(dá)的非特異效應(yīng)。

因而，采用RNase III 制備siRNAs混合庫可以成為有別于傳統(tǒng)方法的制備siRNA的另一種好辦法。

適用：1.快速經(jīng)濟(jì)地研究某個(gè)基因功能缺失的表型

2.只需要運(yùn)用RNAi 技術(shù)作為遺傳工具，快速得到RNA干擾結(jié)果，而無需詳細(xì)研究siRNA具體信息的研究人員
不適用：1.長時(shí)間的研究項(xiàng)目

2.需要一個(gè)特定的siRNA，特別是基因治療