在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 

雙鏈DNA探針切口平移法

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-06
    當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'端補上核苷酸,從而使切口沿著DNA鏈移動,用放射性核苷酸代替原先無放射性的核苷酸,將放射性同位素摻入到合成新鏈中。最合適的切口平移片段一般為50-500個核苷酸。切口平移反應受幾種因素的影響: (a) 產物的比活性取決于[α-32 P]dNTP的比活性和模板中核苷酸被置換的程度。(b) DNA酶Ⅰ的用量和E.coli DNA聚合酶的質量會影響產物片段的大小。(c) DNA模板中的抑制物如瓊脂糖會抑制酶的活性, 故應使用仔細純化后的DNA。
  材料: 待標記的DNA。
  設備:高速臺式離心機,恒溫水浴鍋等。
  試劑:
  (1)10×切口平移緩沖液:0.5mol/L Tris·Cl (pH7.2); 0.1mol/L MgSO4 ; 10mmol/L DTT; 100μg/ml BSA。
  (2)未標記的dNTP原液:除同位素標記的脫氧三磷酸核苷酸外,其余3種分別溶解于50mmol/L Tris·Cl (pH7.5)溶液中,濃度為0.3mmol/L。
  (3)[α-32 P] dCTP或[α-32 P]dATP:400 Ci/mmol, 10μCi/μl。
  (4) E.coli DNA聚合酶Ⅰ(4單位/μ l):溶于50μ g/ml BSA, 1mmol/L DTT, 50%甘油,50mmol/L Tris·Cl(pH7.5)中。
  (5)DNA酶Ⅰ:1mg/ml。
  (6)EDTA :200mmol/L (pH8.0)。
  (7)10mol/L NH4Ac。
  操作步驟:
  (1) 按下列配比混合:
    未標記的dNTP 10μl
    10×切口平移緩沖液 5μl
    待標記的DNA 1μg
    [α-32 P]dCTP或dATP(70μCi) 7μl
    E.coli DNA聚合酶 4單位
    DAN酶 I 1μl
    加水至終體積 50μl
  (2) 置于15℃水浴60分鐘。
  (3) 加入5μl EDTA終止反應。
  (4) 反應液中加入醋酸銨,使終濃度為0.5mol/L, 加入兩倍體積預冷無水乙醇沉淀回收DNA探針。
 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.153 second(s), 19 queries, Memory 0.88 M
主站蜘蛛池模板: 欧美呜巴又大粗又长 | 丁香六月婷婷激情 | 91成人午夜性a一级毛片 | 欧美干色 | 国产黄色小视频网站 | 四虎美女| 丁香花在线电影小说观看 | 夜夜艹日日干 | 久操免费在线 | 久久大香线蕉综合爱 | 亚洲五月综合网色九月色 | 激情综合色综合啪啪开心 | 日本特黄在线观看免费 | 天天做天天爱天天操 | 五月亭亭免费高清在线 | 黄网站在线播放 | 婷婷综合色 | 中文在线 | 中文 | 久久免费公开视频 | 在线亚洲欧美性天天影院 | 色多多高清在线观看视频www | 久久精品国产99国产精品免费看 | 爽死你个放荡粗暴小淫视频 | 国产 高清 在线 | 亚洲成人免费在线 | 九月婷婷综合婷婷 | 国产成人99久久亚洲综合精品 | 51精品视频免费国产专区 | 欧美亚洲综合一区 | 天天拍拍天天爽免费视频 | 成人在线免费网站 | 深夜影院一级毛片 | a级毛片网站 | 欧美色视频超清在线观看 | 日本又粗又长一进一出抽搐 | 老司机精品视频免费 | 免费观看视频网站 | 手机在线看片国产日韩生活片 | 天天舔天天干 | 黄色 在线| 免费看黄的视频软件 |