|
對照組的總RNA提取 mRNA完整性鑒定 |
|
實驗組的總RNA提取 mRNA完整性鑒定 |
|
↓ ↓ |
||
|
錨定引物逆轉錄成cDNA |
|
錨定引物逆轉錄成cDNA |
|
↓ ↓ |
||
|
采用隨機引物和逆轉錄引物進行選擇性PCR擴增 |
|
采用隨機引物和逆轉錄引物進行選擇性PCR擴增 |
↓ ↓
|
擴增產物進行凝膠電泳分析 |
ß
|
差異性條帶的回收與第二次擴增 |
ß
|
Northern雜交，Southern雜交再次確定差異性條帶的真實性 |
ß
|
差異性條帶的克隆、測序、分析，DNA及氨基酸序列聯機檢索 |
ß
|
以差異性條帶為探針克隆出基因組文庫中的基因 序列及cDNA文庫中的全長cDNA序列 |
ß
|
基因功能的鑒定： ①knock out ②dominant negative mutation ③原核系統(tǒng)或真核系統(tǒng)中的表達翻譯。抗體的制 備，細胞內的定位，抗體抑活等等。 ④one hybrid判斷出該基因的“啟動”基因。 ⑤two hybrid判斷出該基因的產物的作用途徑。 |
這里以CLONTECH公司生產的DeltaTM Differential Display Kit為例，介紹具體的實驗步驟。該試劑盒中含有10種任意引物和9種Oligo(dT)引物。
