在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 

玻片PCR

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01
在聚丙烯管中可以對多種含膜板材料進行PCR,而在顯微玻片上用組織細胞涂片或切片直接進行DNA擴增的方法就稱為玻片PCR(Slide-PCR)。
  先將細胞涂片或呈單層細胞,然后用甲醇/醋酸(3:1,V/V)、Carnoy溶液、無水乙醇或4%多聚甲醛溶液固定5~15min。用蒸餾水沖洗,干燥,直接使用或保存于-20℃備用。在玻片上劃20mm×28mm為免疫組化反應區。加入30μl PCR反應混合液,其中含10mmol/L Tris pH8.3,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,200μmol/l dNTPs,100nmol/L引物,0.01%(V/V)明膠,0.2% BSA, 2.5u/100μl Taq酶。然后蓋上22mm×40mm的蓋玻片,邊緣用石蠟油封好。把玻片放入PCR熱循環儀金屬塊上,使金屬塊與樣品呈最大程度接觸,同在聚丙烯管中一樣,進行30~40個循環。對于較短的擴增片段在后期循環中變性溫度可降低。反應后,將致冷玻片放在氯仿中除去大部分石蠟油,但不取出蓋玻片,用一個尖鑷子輕輕拈起蓋玻片一角,在相對的一角中PCR反應混合液呈半月形液面,用移液器回收。一般可回收25μl混合液,將反應產物進行瓊脂糖電泳或用套式PCR引物按標準PCR進行重新擴增。片上擴增物可做原位雜交顯示。
  在Slide-PCR中,需0.1%~1%的BSA。加入BSA可以保證擴增結果,但效率不一定很高。明膠(至少0.0001%),對擴增1kb左右的靶DNA十分重要。但對小片段擴增結果影響不大。不同的樣品提取方法或固定法對Slide-PCR都可行。
  Silde-PCR的機理可能是在起始變性過程中一部分DNA從細胞中洗提出來,然后在細胞和玻片的水相中進行PCR。用地高辛標記的人全基因組DNA探針雜交表明在起始循環中DNA極微量,而30個循環后很豐富。常規細胞染色表明只有少量的形態改變。
  Silde-PCR對于玻片上的細胞樣品提供了一種較好的方法,而不必再把這些樣品從玻片上括下來,使操作簡便,污染減少。本方法對于原樣品量極微且需病史追蹤保存的(如子宮頸涂片或涂片)具有實用價值。
 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.469 second(s), 858 queries, Memory 2.69 M
主站蜘蛛池模板: 看片地址| 精品国产一区二区三区国产馆 | 久草免费色站 | 国产1024一区二区你懂的 | 国产午夜视频 | 男操女视频在线观看 | 老司机成人精品视频lsj | 日本最黄视频 | 欧美在线区 | 久久99久久精品免费思思6 | 美女网站在线观看视频18 | 美国一级毛片不卡无毒 | 一区二区三区伦理 | www永久免费视频 | 欧美性色xo影院永久禁欲 | 九九视频只有精品 | 性久久久久久久久 | 日本丶国产丶欧美色综合 | 天天干天天操天天碰 | 免费网站看黄 | 色多多在线播放 | 亚洲欧洲一区二区三区在线观看 | 直接看黄的网站 | 好紧好湿好黄的视频 | 在线观看永久免费视频网站 | 2018天天操夜夜操 | 婷婷综合久久狠狠色99h | 天天怕夜夜怕狠狠怕 | 六月丁香啪啪 | 美女屁屁免费视频网站 | 激情文学综合丁香 | 日日夜夜狠狠干 | 免费公开在线视频 | 视频色版| 色爽爽爽 | 88av视频在线 | 天天摸天天爽天天澡视频 | 色婷婷婷丁香亚洲综合不卡 | 天天色天天操天天射 | 欧美成人性色区 | 天天鲁天天爽精品视频 |